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Muestras
50 mL de PFC y 50 mL de CP (PPP y PRP, respectivamente) al azar. Ambos con serología no reactiva, preferiblemente del mismo donante (o al menos del mismo
tipo sanguíneo) antes de su fecha de vencimiento en
tubos cónicos de 50 mL (BD FalconTM, BD Bioscience).
FN, BIOMERIEUX INC, Durham) para el control de calidad microbiológico.
Las pruebas de coagulación (TP, TPT y fibrinógeno),
así como el conteo de plaquetas sirven para observar
si una alteración en los valores de las pruebas pueden
explicar los tiempos de gelificación observados.
Análisis estadístico
Preparación de la trombina
A 9 mL de plasma pobre en plaquetas (PPP), se agregó 1 mL de gluconato de calcio al 10% (ampolla de 10
ml, 100 mg/ml, ALCAMES, Laboratorios Quimicos de
Centroamerica S.A.), se agitaron suavemente por inversión y se incubaron a 37oC durante 10 a 20 minutos, o
hasta lograr gelificación total, no más de 30 minutos.
Luego, se golpearon suavemente los geles para desprender los coágulos y se extrajeron con una jeringa
limpia y estéril con aguja de 22 G. El sobrenadante resultante se trasvasó a un tubo cónico estéril de 15 mL
(BD Falcon TM, BD Bioscience) y fue usado como
trombina heteróloga.
Se realizó un ANOVA simple (análisis de varianza en
una vía) para determinar si existen diferencias
estadísticamente significativas en los tiempos de
gelificación promedio entre los tratamientos aplicados.
Se excluyeron de este análisis los geles de plaquetas
que presentaron un comportamiento atipico o no deseable, es decir, tardaron varios minutos en gelificar y
tendieron a comportarse estables durante el periodo
de reposo. Se utilizó para ello el programa Statistix
(Analytical Software), fue necesario separar los datos
de los geles de fibrina de los de plaquetas de un mismo tratamiento, para ser considerados individualmente, lo que ocasiono que se consideraran 18 tratamientos.
Almacenamiento de la trombina
RESULTADOS
Se preparó de la primer muestra de PFC de cada
tratamiento, un exceso de trombina que fue trasvasado
a dos tubos cónicos plásticos de 15 mL (BD FalconTM,
BD Bioscience) para ser almacenada a -80oC y posteriormente utilizada en los geles de las muestras correspondientes a cada tratamiento, después de 24 y 48 horas. Cuando se utilizó trombina congelada, se preparó
una tercera repetición de geles de fibrina; en los casos
en que el volumen del concentrado de plaquetas fue
insuficiente se decidió que la segunda repetición seria
gelificada con la trombina congelada. Esta trombina se
deja descongelar a temperatura ambiente por 10 minutos.
Activación del gel
Se realizaron combinaciones de tres volúmenes diferentes para trombina y gluconato de calcio/diluyente: 0,5;
1 y 1,5 mL (Cuadro 1). Se decidió trabajar cinco muestras
por tratamiento (45 muestras en total) realizando dos repeticiones por triplicado más un control con diluyente IDDiluent 2C (DiaMed-ID, MicroTyping System, DiaMed
Caribbean, Miami, Fl).
Por último se midió el tiempo de gelificacion de los
geles y se dejaron reposar por espacio de una hora para
evaluar su comportamiento in vitro.
Control de calidad
Tres mL de plasma y del sobrenadante de trombina,
se inoculó en botellas BacT/ALERT® PF o BacT/ALERT®
Pág. 148
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Gelificación
Se observaron diferencias estadísticamente significativas (P= 0.0005) entre los tiempos promedio de ambos geles del tratamiento 3 (6:0.5:1.5) y los geles de
fibrina del tratamiento 7 (6:1.5:0.5) los demás casos
son estadísticamente iguales entre sí (para un α = 0.010
para la prueba de Tukey). Todos los geles del tratamiento
3 se formaron antes de 90 s. Los geles de fibrina del
tratamiento 7 se formaron entre 100 y 300 s.
La mayoría de los controles fueron negativos ya
que, no presentaron gelificación total, o presentaron
gelificación leve pocos minutos después que su gel
correspondiente. A efectos prácticos, un control se
consideró positivo únicamente cuando presentó algún grado de gelificación en el mismo período de
tiempo que su gel correspondiente (Fig. 1).
Comportamiento in vitro de los geles plaquetarios
en reposo.
Se observó que los geles de fibrina preparados con
plasma fresco congelado se mantenían estables con el
tiempo, mientras que los geles de plaquetas presentaban retracción de su coágulo pocos minutos después
de gelificar, retrayéndose al máximo en aproximadamente una hora, en la mayoría de los casos. Esto último se observó relacionado con el contenido de
plaquetas de la bolsa de concentrado plaquetario, que
a su vez depende del conteo basal de plaquetas (en
sangre total) del donante (Cuadro 2 y 3).
Vol. XXXVIII / N° 2 / 2012
Págs. 147 / 153
Cerdas-Quesada, César;
Gamboa Cordero, Bernardo;
Valverde Calderón, Giselle